当移液量程从 0.2 到 5 µL 时,移液准确度和精密度至关重要,因此良好的移液技术至关重要,因为小量程时处理错误更加明显。
随着越来越多的重点放在降低试剂和成本上,对较小量程的需求量很大,例如用于制备 PCR Mastermix 或酶反应。但是,移取 0.2 – 5 µL 的小量程对移液准确度和精密度提出了新的挑战。以下几点是必不可少的:
移液器和吸头尺寸:始终选择标称量程尽可能小且吸头最小的移液器,以使气垫尽可能小。例如,当移取 1 µL 时,选择 0.25 – 2.5 µL 移液器和匹配的吸头,而不是 1 – 10 µL 移液器。
校准和维护:正确校准和维护移液器至关重要。移液器上的小调整和损坏的部件会导致系统和随机误差值的大量增加。根据 ISO 8655 必须每年进行一次校准。
容积式移液器:检查您的实验室中是否有容积范围较小的容积式移液器。一般来说,使用这种类型的移液器在准确度和精确度方面比使用经典气垫移液器的移液结果更好。
尝试使用更大的量程:您可以考虑稀释样品以在最终反应中以相同的数量吸取更大的量程。这可以减少样品量程非常小的移液错误。
除了好的工具外,研究人员还必须具备非常好的移液技术。请特别注意以下步骤:
吸头连接:请勿将移液器卡在吸头上,因为这可能会损坏精细的吸头端,导致液体束重新定向或损坏孔口。仅在连接吸头时施加轻微压力,并使用带有弹簧式吸头锥的移液器。
握持移液器:在等待离心机、循环仪等时,请勿将移液器握在手中。移液器内部会发热并导致气垫膨胀,导致移液时与设定的量程发生偏差。
预润湿:吸头和移液器内的空气加湿使吸头为样品做好准备,并避免在吸取转移量程时蒸发。
垂直抽吸:这在处理小量程时非常重要,以避免移液器倾斜时发生的毛细管效应。
浸入深度:尽可能少地浸入吸头,以防止液体由于毛细管效应进入吸头。经验法则:尖端和量程越小,浸入深度越低。移液小量程时,云顶国际·(中国)唯一官方网站建议最大为 2 mm。
以 45° 角分液:当移液器保持在 45° 角时,可以保证液体的最佳流出。
与容器壁或液体表面接触:只有当尖端紧贴容器壁或浸入液体中时,才能正确分配小量程。即使是尖端的最后一滴也可以准确分配。
吹出:在分配少量液体后必须吹出,以分配尖端中存在的最后一滴液体。吹扫也应靠着容器壁进行。在液面吹气时,注意不要将气泡带入样品中。